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主成分分解裸露与C3GN病例对比中国

发布日期:2024-06-27 18:11    点击次数:197

C3肾小球体病(C3 glomerulopathy)是一种由代替阶梯救助尽头运转的旷费病痛。C3G可借用电子显微镜进一步分为C3肾小球体肾炎(C3GN)和了不起千里积物病(DDD),这两种病痛在肾活检免疫荧光磋磨中均以亮堂的肾小球体C3染色为象征。DDD和C3GN之间的重要区别象征是了不起千里积物在DDD看起来密度很高,而在C3GN却不了不起,但尚不明晰其缘由。

好意思国明尼苏达州罗切斯特市梅奥病院卵白质组学核心的内行博士在国外顶尖医学期刊Kidney International(IF 14.8)上发布了立异磋磨结果“Apolipoprotein E is enriched in dense deposits and is a marker for dense deposit disease in C3 glomerulopathy”。 本磋磨对C3GN和对照病例开展激光拿获显微切割和质谱、免疫组化和共聚焦显微镜,研讨了不起千里积物在DDD中密度高的缘由。

磋磨样本

C3GN患者12例,DDD患者12例。其中对别称DDD患者开展了断绝2年的两次MS磋磨。

磋磨举动

对网罗到的样本开展FFPE包埋切片,利用激皎皎微切割对肾小球体地区开展接收,汇聚LC-MS/MS工夫开展卵白质的抒发象征分解。

磋磨截止

1. C3GN、DDD和对照样本各12例的LCM/MS中国

与对照组对比,咱们起初不雅察了C3GN和DDD的补体卵白的周围。DDD与0时刻移植活检的线性倍数转变裸露再C5, C6, C8, C9, C7, ApoE, 补体因子H关连(CFHR)5, C3, CFHR1, 和补体因子H (CFH)有差异进度的上升(图1a)。对比DDD和C3GN中的补体卵白的互异周围,终端阶梯的补体卵白增添了6至9倍(图1c)。真理的是,DDD和C3GN中C3的反向丰采相同,莫得显赫转变。两组之间的总卵白质倍数转变互异用火山图(图1d)和热图(图1e)开展了显示。与C3GN对比,DDD ApoE丰采增添了9倍(图1c)。余下值得防卫的卵白质包含载脂卵白A-V、载脂卵白A-II、体皮毛连卵白均有差异进度的上调。余下补体DDD或C3GN中救助卵白CFH、CFHR5或CFHR1的反向丰采无显赫互异。热图还裸露了DDD和C3GN之间补体救助卵白的卵白质组学粗略(图 1d-e)。与C3GN对比,ApoE是DDD最了解、最丰盈的卵白质,第二是C7、C8和C9。最后,主成分分解裸露与C3GN病例对比,DDD病例的聚类更密切(图1f)。

图1 了不起千里积物病痛(DDD),C3肾小球体肾炎(C3GN)和对照病例的激光拿获显微剖解和质谱磋磨

2. DDD和C3GN中ApoE的IHC染色

磋磨东说念主员发现DDD病例中沿肾小球体基底膜和系膜ApoE的IHC染色呈阳性(图2),鲍曼氏囊上也有染色。图2a裸露沿着GBM和鲍曼氏囊的阳性ApoE染色,以及局灶性管状基底膜染色。硬化的肾小球体在毛细血管中裸显现激烈的ApoE染色阳性。对照组和C3GN中的ApoE IHC染色阴性。在包含微微恙变病痛、IgA肾病、局灶节段性肾小球体硬化、糖尿病、狼疮性肾炎和膜性肾病的对照病例中,肾小球体系膜和肾小球体基底膜的ApoE IHC染色也呈阴性。图2b裸露了对照组和C3GN病例中沿着GBM和鲍曼氏囊的阴性ApoE染色。此外还对DDD和C3GN的ApoA-V开展了IHC染色,截止裸露DDD和C3GN的ApoA-V染色很少或莫得染色。

图2 ApoE的IHC染色

3. DDD和C3GN的ApoE共聚焦显微镜查验

对DDD、C3GN、膜性肾病和0时刻移植前面肾移植活检的代办性病例开展共聚焦显微镜查验,以阐述LCM/MS截止(图3)。共焦显微镜查验裸露,在DDD样本中,ApoE沿GBM、鲍曼氏囊和肾小管基底膜局灶性染色亮堂,但C3GN、膜性肾病和0时刻植入前面肾移植活检染色为阴性。图4 裸露了C3GN(病例6)和DDD(病例9)的代办性病例周围。C3GN和DDD均在光学显微镜下裸露增殖性肾小球体肾炎,在IF显微镜下裸露C3亮染色,C3GN中可见大的内膜下毛细血管壁千里积,DDD可见了不起的膜内千里积,C3GN中ApoE染色阴性,但在DDD病例中IHC染色和共焦显微镜下均可见ApoE亮染色。

图3 ApoE的共聚焦显微镜查验

图4 肾小球体肾炎(C3GN)和密集千里积病(DDD)的活检

4. 考据磋磨

对31例C3G开展ApoE IHC染色。其中DDD病15例,C3GN病16例。IHC染色前面卫不明晰C3GN或DDD的会诊。基于EM的DDD或C3GN会诊随后由MH阐述。 凭依证ApoE染色阳性,15例DDD病例中有12例(80%)被确诊。由于无显然ApoE染色,16例C3GN中有13例(81.3%)确诊为C3GN。 凭依证ApoE染色和与EM截止的关连性,80.6%的病例被正确会诊为DDD病或C3GN。 凭依证考据磋磨,ApoE IHC染色会诊DDD的阳性瞻望值为80%,阴性瞻望值为81.25%。

小结

本文对12例C3GN病例和12例DDD病例的肾小球体开展了LCM/MS卵白质组学分解,对比其反向卵白丰采互异,分解了C3GN病例和DDD病例与0时刻决策移植前面肾活检的卵白质组学象征,C3GN和DDD的组别标明补体卵白和补体救助卵白的蓄积显赫增添。IHC染色和共聚焦显微镜查考据实了LCM/MS的发现。要而言之,与C3GN对比,磋磨裸露DDD生存ApoE和最后阶梯补体卵白的显赫富集,并诠释ApoE是DDD中了不起千里积物的重要成分。本磋磨是首个裸露ApoE在DDD中蓄积的磋磨,因而,ApoE染色可四肢EM的帮助技能用于DDD病的会诊,在EM不成用时拥有关键价钱。

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